gilent液相色譜儀標準操作程序 
 
1.目的：建立一個(gè)液相色譜的標準操作程序。

2.范圍：適用于A(yíng)gilent液相的使用。

3.責任：使用Agilent液相的化驗員。

4.程序

4.1工作環(huán)境 
實(shí)驗室溫度為20～27℃，溫度變化<3℃/hr，相對濕度<80%，液相色譜儀工作臺，長(cháng)2米、寬0.8米、承重大于80公斤，離墻距離0.3米以上。單相交流220V，（+5%～10%），50～60Hz，有單的良好接地。配置穩壓電源，功率大于2.5千瓦。

4.2使用前的準備 
4.2.1二次蒸餾水，（建議用0.45微米水相濾膜過(guò)濾）；甲醇或乙晴（色譜純），（建議用0.45微米有機相濾膜過(guò)濾）；其他樣品所需流動(dòng)相，（都需經(jīng)過(guò)0.45微米濾膜過(guò)濾）。將上述溶劑放入超聲波池，除去氣泡，方可使用。 
4.2.2把流動(dòng)相放入溶劑瓶中，打開(kāi)purge閥，單擊pump圖標，出現參數設定菜單，單擊setup選項，進(jìn)入pump編輯畫(huà)面，設flow：5ml/min，單擊OK；單擊pump圖標，出現參數設定菜單，單擊pump control選項，選中ON，單擊OK，則系統開(kāi)始purge，直到管線(xiàn)內（由溶劑瓶到泵入口）無(wú)氣泡為止，切換通道繼續purge，直到所有要用通道無(wú)氣泡為止；單擊pump圖標，出現參數設定菜單，單擊setup選項，進(jìn)入pump編輯畫(huà)面，設flow：1.0ml/min，關(guān)閉purge valve。單擊pump下的的瓶圖標，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積，也可輸入阻止分析和關(guān)泵的體積，單擊OK。

4.2.3進(jìn)行樣品前處理（稀釋或溶解至所需濃度）。

4.3實(shí)驗步驟

4.3.1準備 
4.3.1.1開(kāi)啟Agilent 1100LC各模塊電源。

4.3.1.2打開(kāi)計算機，雙擊online圖標。 
4.3.1.3從"view"菜單中選擇"method and run control"畫(huà)面，單擊"view"菜單中的"show top toolbar","show status toolbar","system diagram","sampling diagram"使其命令前有"√"標志。

4.3.2數據采集方法編輯 

4.3.2.1從“method"菜單中選擇"edit entire method"項，選中除"data analysis"外的三項，單擊OK，進(jìn)入下一畫(huà)面。 
4.3.2.2在"method comments"中加入方法的信息（如This is for test!），單擊OK進(jìn)入下一畫(huà)面。

4.3.2.3泵參數設定 
在"flow"處輸入流量1ml/min，在"solvent"處輸入流動(dòng)相中各溶劑所占的比例，也可"insert"一行"timetable",編輯梯度。在"pressure limits max"處輸入柱子的zui大耐高壓，以保護柱子，單擊OK進(jìn)入下一畫(huà)面。

4.3.2.4柱溫箱參數設定 
在"temperature"下面的方框內輸入所需的溫度，并選中它點(diǎn)擊"more>>"鍵，如圖所示，選中"same as left"使柱溫箱的溫度左右一致，點(diǎn)擊OK進(jìn)入下一畫(huà)面。

4.3.2.5 VWD檢測器參數設定 
在"wavelength"下方的空白處輸入所需的檢測波長(cháng)，在"peak width(response time)"下方點(diǎn)擊下拉式三角框，選擇合適的響應時(shí)間，如>0.1min 。 在"timetable"中可以"insert"一行，可以輸入隨時(shí)間切換的波長(cháng)。

4.3.2.6在"run time checklist"中，選中"data acquisition"，單擊OK。

4.3.2.7單擊“method"菜單，選中"save method as"，輸入一方法名，單擊OK。

4.3.2.8從"run control"菜單中選擇"sample info"選項，輸入操作者姓名，在"data file"中選擇"manual"或"prefix"。 
4.3.2.9從"instrument"菜單中，選擇"system on"。 
4.3.2.10單擊OK，等儀器ready，基線(xiàn)平穩，從"method"菜單中選擇"run method"，進(jìn)樣。 
4.3.2.11進(jìn)樣時(shí)，閥門(mén)位置處于"inject"位置，進(jìn)樣針取樣量應為所規定體積的三倍，用濾紙拭凈針頭表面殘留液，進(jìn)樣時(shí)要輕而快，進(jìn)樣完畢應快速將閥門(mén)搬至"load"位置，進(jìn)樣完畢，數分鐘后將進(jìn)樣針拔下，閥門(mén)回復到"inject"位置。 4.3.3數據分析方法編輯 

4.3.3.1從"view"菜單中，單擊"data analysis"進(jìn)入數據分析畫(huà)面。 

4.3.3.2從"file"菜單中選擇"load signal"選項，選中您的數據文件，單擊OK。

4.3.3.3做譜圖優(yōu)化，從"graphics"菜單中選擇"signal options"選項，從"ranges"中選擇"auto scale"及合適的顯示時(shí)間，單擊OK，或選擇"use ranges"調整。反復進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。

4.3.3.4積分 
4.3.3.4.1從"integration"中選擇"auto integrate"，如積分結果不理想，再從菜單中選擇"integration events"選項，選擇合適的"slope sensitivity","peak width","area reject","height reject"。 
4.3.3.4.2從"integration"菜單中選擇"integrate"選項，則數據被積分。

4.3.3.4.3如積分結果不理想，則重復上兩步動(dòng)作，直到滿(mǎn)意為止。

4.3.3.4.4單擊左邊"√"圖標，將積分參數存入方法。

4.3.3.5打印報告 
4.3.3.5.1從"report"菜單中選擇"specify report"選項，進(jìn)入。 
4.3.3.5.2單擊"quantitative results"框中"calculate"右側的黑三角，選擇所需的報告形式，其他選項不變，單擊OK。 
4.3.3.5.3從"report"菜單中選擇"print report"，則報告結果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機上，則單擊"report"底部的"print"鈕。

4.3.4關(guān)機 
4.3.4.1關(guān)機前，先用水和有機溶劑對系統進(jìn)行梯度沖洗，然后再用有機溶劑沖洗系統，然后關(guān)泵（適用于反相色譜柱）。[正相色譜柱用適當的溶劑沖洗]

4.3.4.2退出化學(xué)工作站，及其他窗口。 
4.3.4.3關(guān)掉Agilent1100電源開(kāi)關(guān)，計算機（用shut down關(guān)）。 
4.4.1色譜柱長(cháng)時(shí)間不用，存放時(shí)，柱內應充滿(mǎn)溶劑，兩端封死。 
4.4.2對于手動(dòng)進(jìn)樣器，當使用緩沖液時(shí)，要用水沖洗進(jìn)樣口，同時(shí)搬動(dòng)進(jìn)樣閥數次。

4.4.3流動(dòng)相使用前必須過(guò)濾、超聲，不能使用多日存放的純化水（易長(cháng)菌），應每天更換純化水。