為了保證分析檢測結果準確、可靠，必須對所采用的分析方法的準確性、科學(xué)性和可行性進(jìn)行驗證，以證明分析方法符合檢測的目的和要求，這就是分析方法驗證。從本質(zhì)上講，方法驗證就是根據檢測項目的要求，預先設置一定的驗證內容，并通過(guò)設計合理的試驗來(lái)驗證所采用的分析方法符合檢測項目的要求。方法驗證在質(zhì)量控制上有重要的作用和意義，只有經(jīng)過(guò)驗證的分析方法才能用于藥品生產(chǎn)的分析檢測，方法驗證是制訂質(zhì)量標準的基礎。方法驗證內容包括方法的專(zhuān)屬性、線(xiàn)性、范圍、準確度、精密度、檢出限、定量限、耐用性和系統適用性等，檢測目的不同驗證要求也不盡相同。
1.專(zhuān)屬性 
    專(zhuān)屬性是指分析方法能夠將產(chǎn)品和雜質(zhì)分開(kāi)的特性，也稱(chēng)為選擇性。對于純度檢測，可在標準品中加入產(chǎn)品中的已知雜質(zhì)，或者直接用粗品，考察產(chǎn)品峰是否受到雜質(zhì)的干擾，對于過(guò)程跟蹤，可用反應體系樣品來(lái)考察有沒(méi)有其它的雜質(zhì)干擾。必要時(shí)使用二極管陣列檢測器或者質(zhì)譜檢測器進(jìn)行色譜峰純度檢查。一般要求產(chǎn)品和雜質(zhì)之間的分離度大于2.0。
2.線(xiàn)性 
    線(xiàn)性是在設定的范圍內，檢測結果與樣品中原料或產(chǎn)品的濃度呈線(xiàn)性關(guān)系的程度。線(xiàn)性是定量檢測的基礎，需要定量檢測的項目都需要驗證線(xiàn)性。一般用貯備液經(jīng)過(guò)精密稀釋?zhuān)蚍謩e精密稱(chēng)樣，制備得到一系列被測物質(zhì)的濃度（5個(gè)以上），按濃度從小到大運行序列，以峰面積和濃度的函數作圖，用zui小二乘法進(jìn)行線(xiàn)性回歸計算，考察分析方法的線(xiàn)性。
3.范圍 
    范圍指在能夠達到一定的準確度、精密度和線(xiàn)性時(shí)，樣品中被分析物的濃度區間。簡(jiǎn)單的說(shuō)，范圍就是分析方法適用的樣品中待測物的濃度zui大值和zui小值。需要定量檢測的分析方法都需要對范圍進(jìn)行驗證，純度檢測時(shí)，范圍應為測試濃度的80％～120％。
4.準確度 
    準確度是指測定的結果與真實(shí)值之間接近的程度，所以也叫做真實(shí)度，需要定量得分析方法均需要驗證準確度。準確度應在規定的范圍內建立，對于原料藥可用已知純度的標準品或符合要求的原料藥進(jìn)行測定，必要時(shí)可與另一個(gè)已建立準確度的方法比較結果。
5.精密度 
    精密度是指在規定條件下，同一均勻樣品經(jīng)多次取樣進(jìn)行一系列檢測所得結果之間的接近程度。精密度一般用相對標準偏差表示，取樣檢測次數應至少6次。
精密度可以從三個(gè)層次考察：重復性、中間精密度、重現性。
a、重復性是在相同的操作條件下、較短時(shí)間間隔內，由同一分析人員測定所得結果的精密度。一般是用100％濃度水平的樣品測定6次的結果進(jìn)行評價(jià)。
b、中間精密度：同一實(shí)驗室，在日期、分析人員、儀器等內部條件改變時(shí)，測定結果的精密度。 
c、重現性：指不同實(shí)驗室之間不同分析人員測定結果的精密度。
6.檢出限 
    檢出限是指樣品中的被分析物能夠被檢測到的zui低量，不需要準確定量。檢出限體現了分析方法的靈敏度。檢出限的測定可以通過(guò)對一系列已知濃度被測物的試樣進(jìn)行檢測，以能準確、可靠檢出被測物的zui小濃度來(lái)確定，也可把已知濃度樣品的信號與噪聲信號進(jìn)行比較，以信噪比為3：1時(shí)的濃度確定檢出限，一般要求能夠達到進(jìn)樣濃度的0.05%。
7.定量限 
    定量限是指樣品中的被分析物能夠被定量檢測的zui低量，其測定結果需要一定的準確度和精密度，定量限體現了分析方法靈敏定量檢測的能力。檢測需要嚴格控制含量的雜質(zhì)，必須考察方法的定量限，以保證雜質(zhì)能夠被準確定量。一般以信噪比為10：1時(shí)相應的濃度或進(jìn)樣量來(lái)確定定量限。
8.耐用性 
    耐用性是指測定條件發(fā)生小的變動(dòng)時(shí)，測定結果不受影響的承受程度，耐用性主要表明方法的抗干擾能力，主要的變動(dòng)因素包括：流動(dòng)相的組成、流速和pH值、色譜柱、柱溫等。經(jīng)試驗，應說(shuō)明小的變動(dòng)能否符合系統適用性試驗要求，以確保方法有效。
9.系統適用性試驗 
    液相色譜分析方法主要依賴(lài)液相色譜儀和色譜柱，在做方法驗證時(shí)，有必要將液相色譜儀、色譜柱、流動(dòng)相與實(shí)驗操作、待測樣品等一起當作完整的系統進(jìn)行評估，并將系統適用性作為分析方法的組成部分，系統適用性便是對整個(gè)系統進(jìn)行評估的指標。一般系統適應性的要求為：分析方法能夠達到0.05%的檢出限，主峰的拖尾因子0.5<Tf<2.5，主峰與雜質(zhì)的分離度大于2.0，空白干凈，主峰處無(wú)系統峰干擾。

    分析方法開(kāi)發(fā)與驗證是一個(gè)整體，在實(shí)際工作中，一般是先開(kāi)發(fā)分析方法，經(jīng)過(guò)適當的優(yōu)化以后再做方法驗證，驗證的部分內容在分析方法開(kāi)發(fā)時(shí)就要做，比如說(shuō)分析方法的專(zhuān)屬性驗證。分析方法驗證并非必須驗證所有的內容，只要注意驗證內容充分，足以證明分析方法的合理性就可以了，如雜質(zhì)限度檢測一般只需要驗證專(zhuān)屬性和檢出限，而精密度、線(xiàn)性、定量限等涉及定量測定的項目，則不需要驗證。
有時(shí)需要對分析方法進(jìn)行全面或部分的再驗證。當原料藥合成工藝發(fā)生改變時(shí)，可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法的專(zhuān)屬性就需要再進(jìn)行驗證，以證明有關(guān)物質(zhì)檢查方法能夠檢測新引入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對主成份的含量測定應無(wú)干擾。當分析方法發(fā)生部分改變時(shí)，如檢測波長(cháng)發(fā)生改變，則需要重新進(jìn)行檢測限、專(zhuān)屬性、準確度、精密度、線(xiàn)性等內容的驗證，以證明改變后的分析方法的合理性、可行性。